Un article informatif sur les applications de Postnova Analytics montre comment sa technologie de fractionnement de flux de champ asymétrique (AF4) peut être utilisée, sans prétraitement d'échantillon, pour séparer les grandes protéines de gluten et fournir des données précises sur le poids moléculaire et la taille moléculaire (Rg).
Système AF4-MALS-RI de Postnova Analytics
L’intérêt pour les protéines de gluten est devenu de plus en plus répandu ces dernières années en raison de l’augmentation de la maladie cœliaque, qui touche jusqu’à 5% de la population mondiale, et par association du besoin de régimes sans gluten. L'un des défis pour l'analyse des protéines de gluten est leur masse molaire relativement élevée et la grande taille moléculaire qui en résulte. Avec des protéines de gluten présentant un poids moléculaire pouvant atteindre 10 millions de Daltons (Da), cela les rend difficiles à séparer et à caractériser par des techniques de chromatographie sur colonne telles que la chromatographie d'exclusion stérique (SEC). Traditionnellement, l'analyse des échantillons de gluten a exigé leur sonication avant la séparation chromatographique et les fragments résultants analysés.
L'article d'application décrit comment un système Postnova AF2000 AF4 a été utilisé avec deux détecteurs surveillant l'éluant pour séparer les glutens et les caractériser. Premièrement, un détecteur de diffusion de lumière à angles multiples (MALS) à 21 angles Postnova pour mesurer le Rg des glutens et de leurs agrégats et agglomérats; et deuxièmement, un détecteur à indice de réfraction (RI) qui est sensible à la concentration en protéines et, en combinaison avec MALS, peut fournir des mesures de poids moléculaire.
Les données présentées montrent comment la technique AF4-MALS-RI peut séparer les grandes protéines de gluten, sans avoir besoin d'un prétraitement des échantillons prenant du temps, permettant une mesure plus directe de leur distribution de poids moléculaire et de rayon de giration (Rg). De plus, pour deux des échantillons analysés, l'extrémité supérieure de la distribution du poids moléculaire était significativement plus élevée que les 10 MDa attendus. Par conséquent, des techniques, telles que SEC, qui utilisent des colonnes de chromatographie auraient filtré certains ou tous ces grands complexes de gluten, ce qui aurait entraîné une détermination incorrecte de la taille globale du gluten et de la distribution du poids moléculaire.